L'osteoartritis (OA) és una de les malalties cròniques degeneratives de les articulacions òssies a llarg termini que afecta la població de més de 65 anys.
1]. En general, els pacients amb artrosi se diagnostica amb cartílag danyat, sinovi inflamat i condròcits erosionats, que desencadenen dolor i angoixa física.
2]. El dolor artrític és causat principalment per la degeneració del cartílag de les articulacions per inflamació i, quan el cartílag està greument danyat, els ossos poden xocar entre ells provocant un dolor insuportable i dificultats físiques.
3]. La implicació de mediadors inflamatoris amb símptomes com ara dolor, inflor i rigidesa de l'articulació està ben documentada. En pacients amb artrosis, les citocines inflamatòries, que provoquen l'erosió del cartílag i l'os subcondral, es troben al líquid sinovial.
4]. Dues queixes principals que tenen els pacients amb artrosi general són el dolor i la inflamació sinovial. Per tant, els objectius principals de les teràpies actuals d'OA són reduir el dolor i la inflamació. [
5]. Encara que els tractaments d'OA disponibles, inclosos els fàrmacs no esteroides i esteroides, han demostrat l'eficàcia per alleujar el dolor i la inflamació, els usos a llarg termini d'aquests fàrmacs tenen conseqüències greus per a la salut, com ara disfuncions cardiovasculars, gastrointestinals i renals.
6]. Per tant, s'ha de desenvolupar un medicament més eficaç i amb menys efectes secundaris per al tractament de l'artrosi.
Els productes naturals per a la salut són cada cop més populars per ser segurs i fàcilment disponibles [
7]. Els medicaments tradicionals coreans han demostrat l'eficàcia contra diverses malalties inflamatòries, inclosa l'artritis.
8]. Aucklandia lappa DC. és conegut per les seves propietats medicinals, com ara millorar la circulació del qi per alleujar el dolor i calmar l'estómac, i s'ha utilitzat tradicionalment com a analgèsic natural.
9]. Informes anteriors suggereixen que A. lappa posseeix antiinflamatoris [
10,
11], analgèsic [
12], anticancerígen [
13], i gastroprotector [
14] efectes. Les diferents activitats biològiques d'A. lappa són causades pels seus principals compostos actius: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactona, α-costol, saussurea lactone i costuslactona.
15]. Estudis anteriors afirmen que el costunolide mostrava propietats antiinflamatòries en els lipopolisacàrids (LPS), que van induir els macròfags mitjançant la regulació de NF-kB i la via de proteïnes de xoc tèrmic.
16,
17]. Tanmateix, cap estudi ha investigat les activitats potencials d'A. lappa per al tractament de l'OA. La present investigació ha investigat els efectes terapèutics d'A. lappa contra l'OA mitjançant models de rosegadors induïts per àcid acètic i MIA (iodoacetat monosòdic).
El iodoacetat monosòdic (MIA) s'utilitza famós per produir bona part dels comportaments del dolor i les característiques fisiopatològiques de l'OA en animals.
18,
19,
20]. Quan s'injecta a les articulacions del genoll, la MIA desordena el metabolisme dels condròcits i indueix inflamació i símptomes inflamatoris, com ara l'erosió del cartílag i l'os subcondral, els símptomes cardinals de l'OA.
18]. La resposta de retorçament induïda amb àcid acètic es considera àmpliament la simulació del dolor perifèric en animals on el dolor inflamatori es pot mesurar quantitativament.
19]. La línia cel·lular de macròfags del ratolí, RAW264.7, s'utilitza popularment per estudiar les respostes cel·lulars a la inflamació. Després de l'activació amb LPS, els macròfags RAW264 activen vies inflamatòries i segreguen diversos intermediaris inflamatoris, com ara TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS i IL-6.
20]. Aquest estudi ha avaluat els efectes antinociceptius i antiinflamatoris d'A. lappa contra l'OA en model animal MIA, model animal induït per àcid acètic i cèl·lules RAW264.7 activades per LPS.
2. Materials i Mètodes
2.1. Material vegetal
L'arrel seca d'A. lappa DC. utilitzat en l'experiment es va adquirir a Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seül, Corea). Va ser identificat pel professor Donghun Lee, departament de farmacologia d'herbes, coronel de medicina coreana, Universitat de Gachon, i el número d'exemplar del val es va dipositar com a 18060301.
2.2. Anàlisi HPLC d'extracte d'A. lappa
A. lappa es va extreure amb un aparell de reflux (aigua destil·lada, 3 h a 100 °C). La solució extreta es va filtrar i condensar mitjançant un evaporador a baixa pressió. L'extracte d'A. lappa va tenir un rendiment del 44,69% després de la liofilització a -80 °C. L'anàlisi cromatogràfica d'A. lappa es va realitzar amb un HPLC connectat mitjançant un sistema HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, EUA). Per a la separació cromàtica, es va utilitzar la columna EclipseXDB C18 (4, 6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) a 35 ° C. Es van diluir un total de 100 mg de la mostra en 10 ml de metanol al 50% i es van sonicar durant 10 min. Les mostres es van filtrar amb un filtre de xeringa (Waters Corp., Milford, MA, EUA) de 0, 45 μm. La composició de la fase mòbil era d'àcid fosfòric (A) i acetonitril (B) del 0,1% i la columna es va eluir de la següent manera: 0-60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% dissolvent B amb un cabal d'1,0 ml/min. L'efluent es va observar a 210 nm amb un volum d'injecció de 10 μL. L'anàlisi es va fer per triplicat.
2.3. Allotjament i gestió d'animals
Es van comprar rates masculines Sprague-Dawley (SD) de 5 setmanes i ratolins ICR mascles de 6 setmanes a Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Corea). Els animals es van mantenir en una habitació amb temperatura constant (22 ± 2 °C) i humitat (55 ± 10%) i un cicle llum/foscor de 12/12 h. Els animals es van familiaritzar amb la condició durant més d'una setmana abans de començar l'experiment. Els animals tenien un subministrament ad libitum de pinso i aigua. Les normes ètiques actuals per a la cura i manipulació d'animals a la Universitat Gachon (GIACUC-R2019003) es van seguir estrictament en tots els procediments experimentals amb animals. L'estudi es va dissenyar en un assaig paral·lel i cec per a l'investigador. Hem seguit el mètode d'eutanàsia segons les directrius del Comitè d'Ètica Experimental d'Animals.
2.4. MIA Injecció i Tractament
Les rates es van separar aleatòriament en 4 grups, a saber, simulació, control, indometacina i A. lappa. Estant anestesiats amb una barreja d'isofluorà O2 al 2%, les rates es van injectar amb 50 μL de MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) intraarticularment a les articulacions del genoll per provocar OA experimental. Els tractaments es van realitzar de la següent manera: els grups de control i simulació es van mantenir només amb la dieta bàsica AIN-93G. Només, el grup d'indometacina va rebre indometacina (3 mg/kg) incorporada a la dieta AIN-93G i el grup A. lappa de 300 mg/kg es va assignar a la dieta AIN-93G complementada amb A. lappa (300 mg/kg). Els tractaments es van continuar durant 24 dies des del dia de la inducció de l'OA a una velocitat de 15-17 g per 190-210 g de pes corporal diàriament.
2.5. Mesura de la càrrega de pes
Després de la inducció de l'OA, es va realitzar la mesura de la capacitat de suport de pes de les extremitats posteriors de les rates amb l'incapacitat-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, EUA) tal com estava previst. Es va calcular la distribució del pes a les extremitats posteriors: capacitat de suport de pes (%)
